豬白細胞介素4（IL-4）試劑盒使用原理

使用目的：
本豬白細胞介素IL-4試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素 -4（IL-4）含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬白細胞介素 -4（IL-4）水平。用純化的豬白細胞介素-4（IL-4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-4（IL-4），再與 HRP標(biāo)記的白細胞介素 -4（IL-4）抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 -4（IL-4）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬白細胞介素 -4（IL-4）濃度。

標(biāo)本要求
．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

操作步驟
.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 0μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌：豬白細胞介素IL-4小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色5分鐘.
0.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。