雜交反應(yīng)是指用雜交液孵育組織切片，雜交液中標(biāo)記的核酸探針在適當(dāng)?shù)臈l件下與組織細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶核酸互補(bǔ)結(jié)合形成雜交體的過(guò)程。雜交液的成分與預(yù)雜交液基本相同，所不同的只是加入標(biāo)記的核酸探針。ELISA試劑盒

    雜交前的準(zhǔn)備只是為雜交成功奠定基礎(chǔ)．要獲得滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在雜交 反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還必須注意以下環(huán)節(jié)。
    雙鏈DNA探針和靶DNA變性

    進(jìn)行雜交反應(yīng)時(shí)．探針和靶核酸必須均是單鏈，兩者方能結(jié)合。如果探針和靶核酸均為雙鏈或二者中有一者是雙鏈。必須通過(guò)變性使其變?yōu)閱捂?。一般通過(guò)加熱變性。變性溫度為95C，5～5分鐘。探針和(或)靶核酸一旦變性，則需立即進(jìn)行雜交反應(yīng)，否則解鏈的核酸又會(huì)重新復(fù)性。如果用單鏈探針檢測(cè)靶RNA，一般不需要變性。有時(shí)單鏈探針較長(zhǎng)，可能會(huì)在局部形成雙鏈，這時(shí)也同樣可通過(guò)加熱處理使局部雙鏈解開(kāi)以利于探針和靶核酸之間的結(jié)合。ELISA試劑盒

    微波爐處理也可使雙鏈DNA探針和靶DNA變性。此法不僅能使雙鏈探針和靶核酸有效地變性，而且還能使雜交信號(hào)增加。這可能是由于微波輻射引起基質(zhì)蛋白質(zhì)變性，使靶核酸暴露，也可能是微波輻射對(duì)靶核酸構(gòu)型產(chǎn)生直接影響，從而提高雜交效率。ELISA試劑盒