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ELISA方法的基本類(lèi)型和操作程序分析

發(fā)布時(shí)間:2022-11-15      點(diǎn)擊次數(shù):499

ELISA試劑盒價(jià)格根據(jù)ELISA所用的固相載體而區(qū)分為三大類(lèi)型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類(lèi)是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱(chēng)為斑點(diǎn)ELISA(Dot-ELISA);再一類(lèi)是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱(chēng)為布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中,又根據(jù)其性質(zhì)不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。

ELISA方法的基本類(lèi)型有以上8種,常用的有間接ELISA法、雙抗體夾心ELISA法和雙夾心ELISA法三種:

.間接ELISA

ELISA試劑盒價(jià)格本法主要用于檢測(cè)抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。 () 材料   ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;  ?、?DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽(yáng)性DVH參考血清;待檢鴨血清;   ③ ELISA檢測(cè)儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。   (2) 方法步驟  ?、?加抗原包被 → 4℃過(guò)夜,洗滌三次、拋干  ?、?加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí),洗滌三次、拋干  ?、?加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時(shí),洗滌三次、拋干  ?、?加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液  ?、?用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值,并計(jì)算出P/N比值。  ?。?) 結(jié)果判定 已知陽(yáng)性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.,而且已知陽(yáng)性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.,而且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽(yáng)性,否則判為陰性。

2.雙抗體夾心ELISA

本法主要用于檢測(cè)大分子抗原?,F(xiàn)以檢測(cè)雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。  ?、?加抗體包被 → 4℃過(guò)夜,洗滌三次、拋干  ?、?加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干  ?、?加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干  ?、?加底物液 → 37℃ 5分鐘,加終止液  ?、?用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

3.雙夾心ELISA

ELISA試劑盒價(jià)格此法與雙抗體夾心ELISA的主要區(qū)別在于:它是采用酶標(biāo)抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標(biāo)記每一種抗體,還可提高試驗(yàn)的敏感性。此法的基本程序?yàn)椋? ?、?加抗體(Ab-)包被 → 4℃過(guò)夜,洗滌三次、拋干  ?、?加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干  ?、?加用非同種動(dòng)物生產(chǎn)的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干  ?、?加入酶標(biāo)抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干  ?、?加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液 ⑥ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

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