elisa試劑盒中通常有兩種抗原抗體反應(yīng)，即加入樣品和酶結(jié)合物后的反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)的完成需要一定的溫度和時(shí)間。這種保溫過(guò)程稱為孵化。有人稱之為孵育，這在elisa試劑盒中似乎不合適。

　　elisa屬于固相免疫分析，抗原和抗體的結(jié)合只發(fā)生在固相表面。以抗體包被的三明治法為例，添加到板孔中的抗原不具有固相抗結(jié)合的平等機(jī)會(huì)。只有靠近孔壁的一層溶液中的抗原與抗體直接接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的過(guò)程，因此需要擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。隨后添加到固相抗原的酶標(biāo)記抗體的結(jié)合也是如此。這就是為什么elisa反應(yīng)總是需要一定的培養(yǎng)時(shí)間。

　　常用的培養(yǎng)溫度為43℃、37℃、室溫和4℃。37℃是實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原和抗體結(jié)合的適宜溫度。建立酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）研究反應(yīng)動(dòng)力學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，在37℃條件下，兩種抗原抗體反應(yīng)在～2h后達(dá)到高峰。為了加速反應(yīng)，可以提高反應(yīng)溫度。有些試驗(yàn)在43℃下進(jìn)行，但不適合更高的溫度。4℃時(shí)抗原抗體反應(yīng)更*。在放射免疫分析中，反應(yīng)主要在冰箱中過(guò)夜，以形成更多的沉淀。但由于所需時(shí)間太長(zhǎng)，一般不在elisa試劑盒中使用。

　　除一些帶有特殊電熱塊的elisa儀器外，一般采用水浴法。elisa試劑盒板可放置在水浴箱中，elisa板底部應(yīng)靠近水面，以快速平衡溫度。為避免蒸發(fā)，應(yīng)將板蓋上，或用塑料密封紙或保鮮膜覆蓋板孔。此時(shí)，反應(yīng)板可以浮在水面上。如果使用培養(yǎng)箱，elisa試劑盒應(yīng)放在濕盒中。濕箱應(yīng)由傳熱良好的材料制成，如金屬。將濕紗布?jí)|在盒底，然后將elisa板放在濕紗布上。濕箱應(yīng)放在培養(yǎng)箱中預(yù)熱至規(guī)定溫度，尤其是在溫度較低時(shí)。無(wú)論是水浴培養(yǎng)還是濕箱培養(yǎng)，反應(yīng)板都不應(yīng)堆放，以確保每個(gè)板的溫度能夠快速平衡。對(duì)于室溫培養(yǎng)的反應(yīng)，操作過(guò)程中的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定范圍內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)室溫為20~25℃，但在具體操作過(guò)程中可根據(jù)手冊(cè)要求進(jìn)行控制。當(dāng)在室溫下培養(yǎng)時(shí)，elisa試劑盒可以平放在控制臺(tái)上。應(yīng)注意的是，孵化溫度和時(shí)間應(yīng)盡可能準(zhǔn)確。為了確保這一點(diǎn)，當(dāng)一個(gè)人操作時(shí)，不應(yīng)同時(shí)測(cè)量?jī)蓚€(gè)以上的板。（內(nèi)容僅供參考，如有問(wèn)題或遇到問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)诰€咨詢，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)）