羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。

3結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

人腦血管平滑肌細(xì)胞

人海馬神經(jīng)元

人少突膠質(zhì)細(xì)胞

人星形膠質(zhì)細(xì)胞

小鼠成纖維細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）

mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NSC，大鼠神經(jīng)干細(xì)胞

RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元

rEPC，大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元

RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元

RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞

RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

RLF, 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞

rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞

RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞

RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞

rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元

MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞