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人腦型脂肪酸結(jié)合蛋白（B-FABP）ELISA試劑盒說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被腦型脂肪酸結(jié)合蛋白（B-FABP）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腦型脂肪酸結(jié)合蛋白（B-FABP）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心0分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心0分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL

3.37℃恒溫箱

人腦型脂肪酸結(jié)合蛋白（B-FABP）ELISA試劑盒操作注意事項

.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標板 2孔×8條 2孔×4條 無

標準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無

樣本稀釋液 6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 0mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液 25mL 5mL 按說明書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2張 2張 無

說明書 份 份 無

自封袋 個 個 無

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、0.5、、2、4、8 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份的20×洗滌緩沖液加9份的蒸餾水。

洗板方法

.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5次。

人腦型脂肪酸結(jié)合蛋白（B-FABP）ELISA試劑盒操作步驟

.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。

7.  每孔加入終止液50μL，5min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于0. ng/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于5%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

免責聲明

.  試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.  嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。