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綿羊谷草轉氨酶(AST)ELISA檢測試劑盒使用說明書
發(fā)布時間:2022-11-15      點擊次數:491

綿羊谷草轉氨酶(AST)ELISA檢測試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被綿羊谷草轉氨酶(AST)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的綿羊谷草轉氨酶(AST)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液:3000轉離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心0分鐘取上清。
5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
綿羊谷草轉氨酶(AST)ELISA檢測試劑盒操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
預處理后的樣本無需稀釋,直接取0μL加樣即可。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻。
綿羊谷草轉氨酶(AST)ELISA檢測試劑盒操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設置標準品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
待測樣本孔先加待測樣本0μL,再加樣本稀釋液40μL;
隨后標準品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體50μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育5min。
所有孔加入終止液50μL,5min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

 

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