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PCR擴(kuò)增試劑盒的特點(diǎn)及使用方法介紹

發(fā)布時(shí)間:2022-11-15      點(diǎn)擊次數(shù):582
       PCR擴(kuò)增試劑盒特點(diǎn):
  1、基于phi29DNA聚合酶的高保真性、高合成率和鏈取代能力。
  2、可以擴(kuò)增基因組達(dá)上萬倍,具有高產(chǎn)量和高保真性的特點(diǎn)。
  3、可使用各種來源的樣品,包括全血,干血,發(fā)根,口腔粘膜刮液培養(yǎng)細(xì)胞,真菌和病毒等。
  4、操作簡便快捷,恒溫(30℃)反應(yīng),無須PCR儀即可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
  5、產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn),包括多重PCR、長片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析(片段差異,微衛(wèi)星差異,SNP,STR)等。
  6、本產(chǎn)品適用于純化好的基因組DNA。
  7、本產(chǎn)品只能用于科研。
  PCR擴(kuò)增試劑盒使用方法:
  1、在PCR塑料管中加入9μLWGA溶液A,加入1μL純化好的gDNA模板(DNA含量最好在10ng~100ng之間)。
  2、在PCR儀器上95℃3分鐘變性模板DNA。
  注意:必須打開熱蓋。
  3、冰上放置待用。
  4、加入10μL2×WGA溶液B,輕柔吹打混勻。
  5、加入1μLphi29DNA聚合酶(10U/μL),輕柔吹打混合均勻。
  6、30℃保溫10~12小時(shí)。最好使用PCR儀進(jìn)行30℃保溫并打開熱蓋保溫。如果采用30℃水浴,最好在樣品管中加入30~50μL石蠟油以防水分蒸發(fā),因?yàn)?0℃長時(shí)間的水浴也能使水分蒸發(fā)到管壁,從而改變反應(yīng)體系中各成分的濃度、降低WGA反應(yīng)效率。如果模板DNA量比較高,WGA三小時(shí)即可檢測(cè)到DNA擴(kuò)增。
  7、65℃保溫20分鐘使phi29DNA聚合酶*滅活,然后-20℃長期放置或立即使用。
  注:由于phi29DNA聚合酶有DNA外切活性,所以強(qiáng)烈推薦反應(yīng)結(jié)束后65℃保溫20分鐘以將酶*滅活以免其干擾后續(xù)反應(yīng)或長期保存時(shí)其降解DNA。
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