首先需要關(guān)注的是試劑盒的靈敏度與特異性。靈敏度決定了檢測(cè)的準(zhǔn)確度，而特異性則關(guān)乎檢測(cè)的專一性。一個(gè)優(yōu)質(zhì)的試劑盒應(yīng)能在樣本中微量目標(biāo)物存在時(shí)仍給出明確信號(hào)，同時(shí)避免與其他相似物質(zhì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)。以下就是判斷試劑盒是否有效的幾種方法。需要注意的是，不同的試劑盒可能有不同的判斷標(biāo)準(zhǔn)，因此在實(shí)際操作中，應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒的說明書，并嚴(yán)格按照說明書的要求進(jìn)行操作。

?一、試劑盒有效性驗(yàn)證指標(biāo)?

?靈敏度檢測(cè)?

使用標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋（如1:2至1:1024），驗(yàn)證最低檢測(cè)限（LoD）是否達(dá)到說明書標(biāo)稱值（如pg/mL級(jí)）?。

陽性樣本的OD值應(yīng)隨濃度遞減呈規(guī)律性變化，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2＞0.98?。

?特異性測(cè)試?

陰性對(duì)照（健康樣本）的OD值應(yīng)顯著低于陽性對(duì)照，且無交叉反應(yīng)（如與相似蛋白無信號(hào)）?。

?二、實(shí)驗(yàn)操作質(zhì)控?

?對(duì)照設(shè)置?

?空白對(duì)照?：僅加稀釋液，用于扣除本底吸光度?。

?陰性/陽性對(duì)照?：驗(yàn)證試劑盒區(qū)分能力，陽性對(duì)照需顯色明顯（S/CO≥1）?。

?重復(fù)性驗(yàn)證?

同一樣本設(shè)置3復(fù)孔，板內(nèi)/板間變異系數(shù)（CV）應(yīng)＜15%?。

?三、結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)?

?有效性判定?

陽性對(duì)照（C線）必須顯色，陰性對(duì)照（T線）無顯色，否則試劑盒失效?。

無效結(jié)果：空白對(duì)照OD值異常升高或標(biāo)準(zhǔn)曲線斷裂?。

?定量分析?

樣本OD值需在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超出線性范圍需稀釋后重測(cè)?。

?四、常見問題排查?

?假陽性/假陰性?：檢查樣本污染、孵育時(shí)間或洗滌步驟是否規(guī)范?。

?顯色異常?：確認(rèn)底物避光保存及終止液添加順序?。