簡要描述:產品可保大鼠背根神經元細胞的生長狀態(tài)。本產品中已包含大鼠背根神經元細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于大鼠背根神經元細胞的體外培養(yǎng)。本產品僅供進一步科研使用,不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。
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產品名稱:大鼠背根神經元細胞
貨號:GOY-01X1083
分類:原代細胞
2.組織來源:脊髓組織
3.產品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:大鼠背根神經元細胞分離自脊椎背根神經節(jié);感覺神經母細胞發(fā)出軸突,呈束狀,左右對稱地從神經管的背部進入,此時的脊神經節(jié)即改稱為背根神經節(jié)。神經系統(tǒng)最基本的結構和功能單位是神經元,即神經細胞,其大小和外觀在中樞神經系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內含神經絲、微管、內質網、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經元突起的粗面內質網可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經元的突起,能在神經元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經節(jié)是周圍神經的主要傳入神經元,是感覺信號傳導的中繼站。背根神經元細胞的獲取較為困難,需要在盡可能短的時間內通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經節(jié)組織。神經組織體外培養(yǎng)方法是當代神經科學一項很有價值的研究手段,背根神經節(jié)富含周圍神經系統(tǒng)感覺神經元,已廣泛用于軸突的導向及再生、中樞及周圍神經系統(tǒng)的髓鞘形成、神經營養(yǎng)因子作用及受體分布、神經細胞衰老機制、基因治療、組織工程等神經科學的研究。
5.方法簡介:公司實驗室分離的大鼠背根神經元細胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法、神經元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質量檢測:公司實驗室分離的大鼠背根神經元細胞經β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 神經元細胞樣 傳代特性 屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
大鼠背根神經元細胞1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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