基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)真核蛋白(Human，人)

簡要描述：基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)真核蛋白(Human，人)緩沖液成份：PBS, pH7.4, containing 5% Trehalose.

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產(chǎn)品名稱：基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)真核蛋白(Human，人)

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Eukaryotic Matrix Metalloproteinase 2 (MMP2)

CLG4; CLG4A; MMP-II; MONA; TBE-1; PEX; Gelatinase A; 72kDa Gelatinase; 72kDa Type IV Collagenase

型號：GOY-01D3038

物種	Homo sapiens (Human，人)
來源	真核蛋白
宿主	E.coli
亞細胞定位	細胞膜, 細胞核
預(yù)測分子量	72.6kDa
實際分子量	75kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽	Ala30~Cys660 with N-terminal His Tag
緩沖液成份	PBS, pH7.4, containing 5% Trehalose.
性狀	凍干粉
純度	> 95%
內(nèi)毒素水平	<1.0EU/μg(LAL法測定)
等電點	5.2
應(yīng)用	Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格	10μg50μg200μg1mg5mg

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1．基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)真核蛋白(Human，人)在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3．取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4．取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1．貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2．懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3．在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4．細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）

7．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

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