γ谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
分光光度法 50 管/48 樣
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
GCL 是 GSH 合成的限速酶,GSH 對(duì) GCL 有反饋抑制作用。GCL 基因表達(dá)受多種因素
調(diào)節(jié),如氧化劑、抗氧化劑、生長(zhǎng)因子和炎癥因子等。GCL 活性高低對(duì) GSH 含量和 GSH/GSSG
比值有重要影響。
測(cè)定原理:
在 ATP 和 Mg2+存在下,GCL 催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸;同時(shí) ATP 去磷
酸化產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷分子,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷增加速率,即可計(jì)算出 GCL 活性。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、冷凍離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體 70mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 14mL 蒸餾水充分震蕩溶解。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入蒸餾水 3.5 mL 充分震蕩溶解。
試劑四:液體 16mL×1 瓶,室溫保存。
試劑五:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 30mL 蒸餾水,充分震蕩溶解后,緩緩加入 1.0 mL
濃硫酸(自備),邊加邊攪拌
