轉(zhuǎn)氫酶1測(cè)試盒紫外分光光度法
50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
TH 位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六,催化 NADH+NADP+和
NAD++NADPH 相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱為 TH-1。線粒體 NADH 含量增加時(shí)會(huì)導(dǎo)致線粒
體膜的 H+電化學(xué)梯度升高,因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上 ROS 的產(chǎn)生。TH-1 促進(jìn) NADH 轉(zhuǎn)換
為 NADPH,從而提高線粒體的抗氧化能力。
測(cè)定原理
NADH 和 NADPH 均在 340nm 有特征吸收,因此 TH 催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致 340nm
吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物 3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代 NADP+,
TH-1 催化 APADP+還原生成的 APADPH 在 375nm 有特征光吸收,因此通過測(cè)定 375nm 光
吸收增加速率,來計(jì)算 TH-1 活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:液體 50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:液體 25mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:液體 25mL×2 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 支,-20℃保存;
試劑五:粉劑×2 支,-20℃保存;
