簡要描述:E-cadherin 免疫組化檢測試劑盒 H,M,R,Rb 對已知表達蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。
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E-cadherin 免疫組化檢測試劑盒 做線粒體膜UCP2蛋白的Western Blot (以下簡寫成Western Blot),提取線粒體后凍存(未加蛋白酶抑制劑),樣品不能反復(fù)凍融;,加蛋白酶抑制劑。同時,建議檢查Western Blot過程, 提高一抗?jié)舛取τ诩拥鞍酌敢种苿﹣碚f,一般加PMSF就可以了,能多加幾中種蛋白酶抑制劑。
同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測,有的甚至可以同時測幾十種樣品。
如果是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑就要溫和得多,這時加上NaF去抑制磷#化酶的活性。
樣品的蛋白含量很低,每微升不到微克,但是在轉(zhuǎn)膜時經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉(zhuǎn)到了膜上,就是在轉(zhuǎn)膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在,只是顏色變淡了,可以加大上樣量,轉(zhuǎn)移時可以用減少電流延長時間,多加5-0%甲醇。
E-cadherin 免疫組化檢測試劑盒想分離的蛋白是分子量260kd的,SDS-PAGE電泳的分離膠濃度用6%,Stacking Gel 3.5%,但260kd的蛋白不好做
如果上樣量超載,可以濃縮樣品,也可以根據(jù)你的目標分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地,超載30%是不會有問題的。如果已經(jīng)超了不少了,而且小分子量的也要,可以考慮加大膠的厚度,可以試試.5mm的 comb。
蛋白變性后存放-80℃,一兩年沒有問題,zui關(guān)鍵兩條:不要被蛋白酶水解掉;不要被細菌消化掉(也是被酶水解了)。
E-cadherin 免疫組化檢測試劑盒采用DAB顯色技術(shù),二抗是化的多克隆抗體,三抗是親和素體系,不能使用脫脂奶粉,脫脂奶粉會影響親和素的生成,因為脫脂奶粉中含,用BSA代替應(yīng)該好一點.
Western Blot一般上樣30-00微克不等,結(jié)果跟目的蛋白的豐度、上樣量、一二抗的量和撫育時間都有關(guān)系,也與顯色時間長短有關(guān)。開始摸條件時,為了拿到陽性結(jié)果,各個步驟都可以量多一點時間長一點,當(dāng)然背景也就出來了。要拿到好的結(jié)果,如果抗體好的話比較容易,抗體不好的話就需要反復(fù)地試了,當(dāng)然有的不適合Western Blot的怎樣做也不行。所以拿到好的結(jié)果不容易。
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