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簡要描述：MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)生長培養(yǎng)基MEMα＋10%FBS＋1%P/S 凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
產(chǎn)品型號：GOY-01X0376 廠商性質(zhì)：科研更新時(shí)間：2023-10-24 00:00:00訪 問 量：545產(chǎn)品分類
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公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14) | 1×10?/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0376 |
商品詳情：
名稱；MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)
(種屬鑒定正確)
別稱 MC3T3-E1 SUBCLONE 14
種屬 小鼠
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 MEMα＋10%
FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆，從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14在抗壞血酸和3-4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。它們10天后形成一個礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。MC3T3-E1 Subclone 24和MC3T3-E1 Subclone 30在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化，不形成ECM，可以作為MC3T3-E1 Subclone 4和MC3T3-E1 Subclone 14的陰性對照。礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA及唾液酸糖蛋白(BSP)、骨鈣素(OCN)和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。植入免疫缺陷小鼠以后，高分化性的亞克隆形成與骨類似的形成小骨的編織骨，低分化細(xì)胞只是產(chǎn)生纖維組織。這些細(xì)胞系是研究體外成骨細(xì)胞分化的好模型，尤其是ECM信號。它們和原代培養(yǎng)顱頂成骨細(xì)胞的行為類似。
年齡（性別） 新生
組織來源 顱頂骨
細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞
生物安全等級 1
致瘤性 Yes, in immunodeficient mice (forms bone-like ossicles).
基因表達(dá)情況 collagen
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一、MC3T3-E1 Subclone 14 (小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、 對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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