?ELISA檢測洗刷步驟優(yōu)化方案?

?一、洗液配制優(yōu)化?

?洗滌劑選擇?

推薦使用0.05%-0.1% Tween-20的PBS緩沖液（pH 7.2-7.4），平衡去污能力與抗原保護?。

高濃度Tween-20（>0.1%）可能破壞抗原-抗體復合物，導致假陰性；濃度過低（<0.05%）則無法有效去除非特異性結合。

?現(xiàn)配現(xiàn)用?

洗液保存超過24小時可能導致Tween-20分層或微生物污染，建議4℃密封保存并于當日使用。

?二、洗刷方法選擇?

?自動化洗板機?

優(yōu)先選擇浮動式洗板機，其吸頭可自由移動，適用于U型/V型底孔板，確保清洗均勻性?。

關鍵參數(shù)設置：

洗液量：300-350μL/孔（補償邊緣蒸發(fā)損失）?

抽吸壓力：-400mbar避免殘留

拍干力度：3-5級可調(diào)?

?手工洗板?

使用多道移液器（8道或12道），采用后向抽吸法，避免槍頭觸碰孔壁?。

每孔洗液量300μL，浸泡30-60秒后拍干5次，及時更換吸水紙防止污染?。

三、質(zhì)量控制?

每批次插入空白對照、低值/高值質(zhì)控品，監(jiān)控背景信號與回收率?。

使用LIMS系統(tǒng)記錄洗板機運行日志與操作人員信息，確?？勺匪菪?。

四、特殊樣本處理?

?高血脂/高蛋白樣本?：增加洗滌次數(shù)至5-7次，或添加0.1% Triton X-100增強去污?。

?低豐度靶標?：減少洗滌次數(shù)至3次，縮短浸泡時間以避免信號丟失。

通過上述優(yōu)化，可將批間變異率控制在5%以下，顯著提升檢測信噪比?。